一、台盼蓝染色原理是什么?
染色原理
正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。
台盼蓝拒染法
台盼蓝拒染法是利用台盼蓝只能将死细胞染成蓝色而活细胞不能被染上的方法检测细胞存活率的一种快速简便的方法。
中文名
台盼蓝拒染法
染色原理
正常细胞具有完整的细胞膜结构,而死亡的细胞其细胞膜结构被破坏。台盼蓝无法通过正常的细胞膜因而正常的细胞不被台盼蓝染上,而死细胞则可被台盼蓝染成蓝色。
流程
(1)将对数生长期的细胞浓度调整为1~10×10细胞/ml,按10~10个细胞接种于96孔板,每孔100 μl;
(2)培养细胞24小时后,对其进行不同处理,每个处理设三个平行对照;
(3)收集细胞,经台盼蓝染色,在倒置显微镜下计数蓝染及不染色细胞,计算细胞存活率;
(4)结果统计:
镜下观察,死细胞被染成淡蓝色,而活细胞拒染。
根据下式求细胞活力:
活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100
注意事项
台盼蓝染细胞时,时间不宜过长。否则,部分活细胞也会着色,会干扰计数。
二、台盼蓝为细胞染色的原理是什么
通常认为细胞膜丧失完整性,细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝(TrypanBlue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝,而死亡的细胞,膜的完整性丧失,通透性增加,细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理,细胞经台盼蓝染色后,可通过显微镜
,直接镜下计数或拍照后计数,实现对细胞存活率比较精确的定量分析。
三、台盼蓝染色分辨死活细胞的原理是什么
原理:活细胞不会被台盼蓝染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。
正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡,这与中性红作用相反。
因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
扩展资料
台盼蓝染色步骤:
1、4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。
2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。
3、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。(终浓度0.04%)
4、计数:在三分钟内,分别计数活细胞和死细胞。
5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。
6、统计细胞活力:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%
台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。
2017年10月27日,世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考,台盼蓝在2B类致癌物清单中。
参考资料来源:百度百科-台盼蓝
四、生物:台盼蓝和健那绿都是有机活性染料,但活细胞为什么会吸收健那绿而不吸收台盼蓝?原理是什么?谢谢!
1、健那绿的染色原理:
线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态。
2、台盼蓝的染色原理:
死细胞通透性变大,染色液可以进入,而活细胞细胞膜完整,染色液不可以进入。
3、两者的原理对比可知:
两者虽然都是有机活性染料,但是健那绿分子量更小,几乎是台盼蓝的一半。
健那绿分子量511.07
台盼蓝分子量960.82
对于活细胞来说,细胞膜根本不允许台盼蓝通过。
而健那绿可以通过,并且可以和线粒体特有的酶反应,但不能和细胞内其它物质反应。
如果是死细胞。台朌蓝可以通过损伤的的细胞膜,将整个细胞染成蓝色,也就是染料本身的颜色。但是,如果健那绿进入死细胞,因为没有相关的酶和它反应,它也不会呈现出什么颜色。
五、台盼蓝染色鉴别死活细胞的原理是什么?
通常认为细胞膜丧失完整性,细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝,而死亡的细胞,膜的完整性丧失,通透性增加,细胞可被台盼蓝染成蓝色。
染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。(终浓度0.04%)。
计数:在三分钟内,分别计数活细胞和死细胞。
镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。
扩展资料:
机理:
正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色,通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡,这与中性红作用相反。
因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。
参考资料来源:百度百科-台盼蓝